Patogenia de mutantes de Salmonella Typhimurium en dos modelos experimentales in vivo / Pathogenesis of Salmonella Typhimurium mutants in two experimental models in vivo

Con la finalidad de evaluar la patogenia en cepas de Salmonella Typhimurium con mutaciones en los genes invG/invE de la Isla de Patogenicidad de Salmonella 1 (SPI-1) y de los genes ssaJ/ssaK en la SPI-2, se evaluaron los modelos asa intestinal ligada de ratón asociado a la observación de los tejidos por microscopía electrónica de transmisión (MET) y la producción de salmonelosis sistémica en ratón. Para ello, se utilizaron seis cepas de Salmonella: S. Typhimurium SL-1344 (cepa control) y sus derivadas mutantes: ∆invEG S. Typhimurium SL-1344 (mutante en SPI-1) y ∆ssaJK S. Typhimurium SL-1344 (mutante en SPI-2), S. Typhimurium (cepa clínica) y sus derivadas mutantes: ∆invEG S. Typhimurium y ∆ssaJK S. Typhimurium. Los resultados de MET permitieron verificar las alteraciones morfológicas del epitelio intestinal en el ratón infectado con cepas de Salmonella cuyos genes de patogenicidad estaban intactos. Fue comprobada la pérdida del poder invasivo solo en las cepas mutadas en la SPI-1. A través del modelo de salmonelosis sistémica en ratón se pudo comprobar la pérdida de la capacidad de diseminación en ambas mutantes. En conclusión los modelos permitieron verificar la importancia que tienen los genes invG/invE de la SPI-1 y ssaJ/ssaK de la SPI-2 en la patogenia de la salmonelosis, utilizando como modelo experimental de infección ratones BALB/c. Se sugieren estos modelos in vivo para evaluar mutantes de genes implicados en la patogenia de Salmonella, ya que representan una herramienta importante para la comprensión de la interacción Salmonella-hospedero(AU)

With the aim of evaluate the pathogenesis in Salmonella Typhimurium strains with mutations in genes invG/invE of Salmonella Pathogenicity Island 1 (SPI-1) and genes ssaJ/ssaK in the SPI-2 models were evaluated ligated intestinal loop associated mouse tissues by observation by transmission electron microscopy (TEM) and the production of mouse systemic salmonellosis. For this, we used six Salmonella strains: S. Typhimurium SL-1344 (control strain) and its derived mutants: ΔinvEG S. Typhimurium SL-1344 (mutant in SPI-1) and ΔssaJK S. Typhimurium SL-1344 (mutant in SPI-2), S. Typhimurium (clinical isolate) and its derived mutants: ΔinvEG S.Typhimurium and ΔssaJK S. Typhimurium. TEM results allowed us to verify the morphological alterations of the intestinal epithelium in mice infected with Salmonella strains whose pathogenicity genes were intact. It was proven invasive power loss only in strains mutated in the SPI-1. Through systemic salmonellosis model mouse we noted the loss of the ability to spread in both mutants. In conclusion, the models allowed us to verify the importance of the invG/invE genes of SPI-1 and ssaJ/ssaK of SPI-2 in the pathogenesis of salmonellosis, using BALB/c mice as an experimental model of infection. These in vivo models are suggested to evaluate mutants of genes involved in the pathogenesis of Salmonella, since they represent an important tool for the understanding of the Salmonella-host interaction(AU)

Ultrastructural analysis of masseter and left medial pterigoid muscles, after unilateral mandibular molar extraction: experimental study / Análisis ultrastructural de los músculos masetero y pterigoideo medial izquierdo, después de la extracción molar mandibular unilateral: estudio experimental

Twelve adult male Wistar rats (220 g average weight) were divided in 3 experimental groups: GI -15. GII ­ 30 and GIII ­ 60 days, after mandibular molar extraction, with three experimental animals and one control per group. Qualitatively, ultrastructural changes of protein filaments from myofibrils of these muscles and ipsilateral to the extractions were observed. Ultrastructure asymmetry and disorganization of Z line and I band, in the experimental group GII, of Medial Pterigoid muscle (MPT) were observed. The temporomandibular dysfunction, stimulated by the unilateral extractions of mandibular molars in rats may lead to modifications in the Z line and I band, which showed to be sensitive to this dysfunction. Changes in the MPT muscle, probably related to its own functional characteristics and major participation in the dynamics of mastication, compared to Masseter were also observed. However, the muscular fibres seem to adapt to the new conditions along the experiment.

Doce ratas Wistar machos adultos (220 g de peso promedio) se dividieron en 3 grupos experimentales: GI - 15, GII - 30 y GIII - 60 días, después de una extracción molar mandibular. En cada grupo se dispusieron tres animales experimentales y un animal como control. Cualitativamente, se observaron cambios ultraestructurales de filamentos de proteínas de miofibrillas de estos músculos masticadores ipsilaterales a las extracciones. Se observó asimetría de la ultraestructura y desorganización de la línea Z y la banda I, en el músculo pterigoideo medial del grupo experimental GII, (MPT). La disfunción temporomandibular, estimulada por las extracciones unilaterales de los molares mandibulares en ratas, puede conducir a modificaciones en la línea Z y en la banda I, que mostraron ser sensibles a esta disfunción. Los cambios en el músculo pterigoideo medial, se debieron, probablemente, con sus propias características funcionales y una mayor participación en la dinámica de la masticación, en comparación con el músculo masetero. Sin embargo, las fibras musculares parecen adaptarse a las nuevas condiciones a lo largo del experimento.

Metformin induces ultrastructural alterations in hepatocytes of spontaneously hypertensive rats / La metformina induce alteraciones ultraestructurales en hepatocitos de ratas espontáneamente hipertensas

Metformin, an oral biguanide approved for the treatment of type II diabetes is widely prescribed for other clinical conditions. Currently, metformin is being investigated as potential anti-tumor agent. However, there have been recent concerns about hepatotoxicity associated with the use of metformin. This study, by means of high resolution transmission electron microscopy (TEM) and morphometry, investigated potential ultrastructural changes induced by metformin treatment on the hepatocytes of spontaneously hypertensive rats (SHR). Morphometric analysis was carried out on images of randomly selected cells from sectioned gluteraldehyde-osmium-fixed, Epon embedded liver tissue. One-way analysis of variance (ANOVA) on morphometric data showed statistically significant differences in the mean volume density (MVD) of lipid bodies (F=136.48, P<0.0001)and mean surface density (MSD) of endoplasmic reticulum (ER) (F=12.45, P<0.003) between hepatocytes of control (n=8) and metformin-treated (MT) (n=8) animals. MVD for control group was 5.42% (±0.36 SEM) but decreased significantly in the MT group (1.13%, ±0.04 SEM). Similarly, MSD of ER for control was 24.7 µm2/µm3 (±1.64 SEM) but decreased for MT animals (18.90 µm2/µm3, ±0.28 SEM). These data are most likely consistent with the effects of metformin on lipid metabolism, and may not reflect on hepatotoxicity induced by the drug, in SHRs.

La metformina, una biguanida oral aprobada para el tratamiento de la diabetes tipo II, es también ampliamente prescrita para otros cuadros clínicos. Actualmente, la metformina está siendo investigada como posible agente anti-tumoral. Sin embargo, ha habido recientes preocupaciones acerca de la hepatotoxicidad asociada con el uso de metformina. En este estudio, por medio de la microscopía electrónica de transmisión (MET) de alta resolución y morfometría, se investigaron los posibles cambios ultraestructurales, inducidos por el tratamiento con metformina, en los hepatocitos de ratas espontáneamente hipertensas (REH). El análisis morfométrico se llevó a cabo en imágenes de células seleccionadas al azar a partir de tejido hepático seccionado, fijado con glutaraldehído-osmio e inmerso en Epon. El análisis de la varianza (ANOVA) de los datos morfométricos mostró diferencias significativas en la densidad de volumen medio (DVM) de cuerpos lipídicos (F=136,48, P<0,0001) y la densidad de superficie media (DSM) del retículo endoplasmático (RE) (F=12,45, P<0,003) entre los hepatocitos control (n=8) y los animales tratados con metformina (MT) (n=8). La DVM para el grupo control fue de 5,42% (±0,36 EEM), pero disminuyó significativamente en el grupo MT (1,13%, ±0,04 EEM). Del mismo modo, la DSM del RE para el grupo control fue de 24,7 µm2/µm3 (±1,64 EEM), pero disminuyó para los animales MT (18,90 µm2/µm3, ±0,28 EEM). Estos datos están probablemente más relacionados con los efectos de la metformina sobre el metabolismo de los lípidos, y no se relacionarían con la hepatotoxicidad por inducción de la droga, en REH.

Electron microscopy of human peripheral nerves of clinical relevance to the practice of nerve blocks. A structural and ultrastructural review based on original experimental and laboratory data.

AIM: The goal is to describe the ultrastructure of normal human peripheral nerves, and to highlight key aspects that are relevant to the practice of peripheral nerve block anaesthesia. METHOD: Using samples of sciatic nerve obtained from patients, and dural sac, nerve root cuff and brachial plexus dissected from fresh human cadavers, an analysis of the structure of peripheral nerve axons and distribution of fascicles and topographic composition of the layers that cover the nerve is presented. Myelinated and unmyelinated axons, fascicles, epineurium, perineurium and endoneurium obtained from patients and fresh cadavers were studied by light microscopy using immunohistochemical techniques, and transmission and scanning electron microscopy. Structure of perineurium and intrafascicular capillaries, and its implications in blood-nerve barrier were revised. RESULTS: Each of the anatomical elements is analyzed individually with regard to its relevance to clinical practice to regional anaesthesia. CONCLUSIONS: Routine practice of regional anaesthetic techniques and ultrasound identification of nerve structures has led to conceptions, which repercussions may be relevant in future applications of these techniques. In this regard, the ultrastructural and histological perspective accomplished through findings of this study aims at enlightening arising questions within the field of regional anaesthesia.

Diagnosis to detect porcine transmissible gastroenteritis virus (TGEV) by optical and transmission electron microscopy techniques / Diagnóstico para detectar el virus de la gastroenteritis porcina transmisible por técnicas de microscopía óptica y electrónica de transmisión

The porcine transmissible gastroenteritis is a highly severe contagious disease, caused by virus of the Coronaviridae family, genus Coronavirus. Its epizootic shape can reach a rate of up to 100 percent mortality in piglets under two weeks of age as a result of severe dehydration. In this study fragments of small intestine and stool samples were collected from 75 autopsied pigs from properties. The samples of the fragments were frozen and sent to the Laboratory of Electron Microscopy, Instituto Biológico, SP, Brazil, for histological and transmission electron microscopic analyses. According to histological H&E technique, atrophy, villous necrosis and destruction of the enterocytes were observed in 35 (46.6 percent) out of the 75 fragments of the small intestine samples. On the immunohistochemistry technique 19 (25.3 percent) fragments were positively stained with DAB in the Ag-Ac reaction (MabTGEV). In 19 (25.3 percent) positive samples analyzed by in situ hybridization, a brown stain of enterocytes was observed, mainly in the epithelial cells of the villi. By the negative staining technique, we visualized enveloped, pleomorphic coronavirus particles, with typical radial projections resembling solar corona, with 140 nm diameter in 21 samples (28 percent) of the small intestine fragments and in 16 (21.3 percent) stool samples. In the ultrathin sections of 21 (28 percent) samples of small intestine, complete coronavirus particles with 80 nm diameter were seen among the microvilli and in the cytoplasm of epithelial cells. Immature particles with 60 nm diameter, budding from cell membrane and from a rough endoplasmic reticulum and also inside the vacuoles were visualized. In 19 (25.3 percent)...

La gastroenteritis transmisible porcina se caracteriza por ser una enfermedad altamente contagiosa y aguda, causada por virus de la familia Coronaviridae, género Coronavirus. Su forma epizoótica puede alcanzar una tasa de hasta 100 percent de mortalidad en lechones con menos de dos semanas de edad, como resultado de deshidratación severa. En este trabajo se recogieron 75 fragmentos de intestino delgado y muestras de heces de 75 cerdos autopsiados. Las muestras se congelaron y se enviaron al Laboratorio de Microscopía Electrónica, del Instituto Biológico, SP, Brasil, para el análisis histológico y por microscopía electrónica de transmisión. Por la técnica histológica de H&E fue observado atrofia y necrosis de la vellosidades además de la destrucción de los enterocitos en 35 (46,6 ppor ciento) de las 75 muestras de fragmentos del intestino delgado. Por inmunohistoquímica 19 (25,3 por ciento) de los fragmentos se tiñeron positivamente por el DAB en la reacción Ag-Ac (MabTGEV). En 19 (25,3 por ciento) muestras positivas mediante hibridación in situ, se observó tinción marrón de los enterocitos, principalmente en las células epiteliales de las vellosidades. Por la técnica de coloración negativa, se observaron partículas de coronavirus, encapsuladas, pleomórficas con proyecciones radiales típicas, en forma de corona solar, midiendo alrededor de 140 nm de diámetro en 21 (28 por ciento) muestras de fragmentos del intestino delgado y en 16 (21,3 por ciento muestras de heces. En cortes ultra finos de 21 (28 por ciento) fragmentos de intestino delgado fueron visualizadas partículas de coronavirus completas con 80 nm de diámetro entre las microvellosidades y en el citoplasma de las células epiteliales y partículas inmaduras de 60 nm de diámetro brotando de las membranas celulares y del retículo endoplasmático rugoso y en el interior de las vacuolas. En 19 (25,3 por ciento)...

Ultrastructural study of bovine papillomavirus during outbreaks in Brazil / Estudio ultraestructural del virus papiloma bovino durante brotes en Brasil

Papillomaviruses, belonging to the Papillomaviridae family, are small oncogenic viruses, causing papillomas and fibropapillomas in the mucosal and cutaneous epithelia of several animals. In bovine species, thirteen types (BPV 1-13) were characterized to date. In this study, the occurrence of papillomatosis in four outbreaks in cattle herds, coming from Brazilian states were registered. The papillomatous lesions were found located in the teats, udders, head and neck. Under the transmission electron microscope, by the negative staining technique, it was possible to visualized rounded-format papillomavirus, with icosahedral symmetry, characterized as "full" and "empty" particles, measuring on average 60 nm in diameter, in all the 40 samples observed of skin lesion fragments. The ultrathin sections revealed the presence of groups of viral, intranuclear, rounded particles measuring 35 nm in diameter and tubular particles with a diameter of 35-39 nm. At immunoelectron microscopy technique, positivity obtained was marked by the presence of aggregates of viral particles formed by the antigen-antibody interaction. In the immunocytochemistry technique, the antigen-antibody reaction showed colloidal gold particles evenly distributed over the surface of the virus. These results showed the importance of the transmission electron microscopy techniques in the diagnosis of bovine papillomatosis that can be used in routine procedures to identify viral agent of this important disease.

Los virus del papiloma que pertenecen a la familia Papillomaviridae son pequeños virus oncogénicos que causan papilomas y fibropapilomas en epitelio cutáneo y mucoso de distintas especies de animales. En el ganado vacuno, trece tipos (BPV- 1-13) se caracterizaron hasta el momento. En este estudio, se documenta la ocurrencia de cuatro brotes de papilomatosis en los rebaños de ganado, procedentes de estados brasileños. Las lesiones papilomatosas se localizaron en los pezones, la ubre, la cabeza y el cuello. Al microscopio electrónico de transmisión, en la técnica de tinción negativa fueran visualizadas partículas del virus del papiloma redondeadas, con simetría icosaédrica, caracterizadas como "llenas" y "vacías", midiendo unos 60 nm de diámetro en todas las 40 muestras de fragmentos de lesión de piel estudiado. Los cortes ultra finos mostraron la presencia de grupos de partículas virales, intranucleares redondeadas con 35 nm de diámetro y tubulares 35-39 nm de diámetro. En la técnica de microscopía inmunoelectrónica, la positividad obtenida se caracterizó por la presencia de agregados de partículas virales formadas por la interacción antígeno-anticuerpo. En la aplicación de la técnica de inmunocitoquímica, la reacción antígeno-anticuerpo mostró partículas de oro coloidal distribuidos de manera uniforme sobre la superficie del virus. Estos resultados muestran la importancia de las técnicas de microscopía electrónica de transmisión en el diagnóstico de papilomatosis bovina, que pueden ser utilizados en los procedimientos de rutina para la identificación del agente viral causante de esta importante enfermedad.

Avian paramyxoviruses: detection by transmission electron microscopy techniques / Paramixovirus aviario: detección por técnicas de microscopía electrónica de transmisión

Diseases caused by avian paramyxovirus (APMV) occur in commercial, captive and wild birds worldwide, demonstrating the significant economic and ecological importance of these agents. Paramyxoviruses belong to the paramyxoviridae family, paramyxovirinae subfamily and avulavirus genus. During the period 2000 to 2011, stool and small intestine samples of 1647 birds species were sent to the Laboratory of Electron Microscopy, Biological Institute of São Paulo, Brazil, for diagnosis of viral agents. The samples were processed by negative staining (rapid preparation) and resin embedding techniques. Under the transmission electron microscope by negative staining technique, in 294 (17.8 percent) samples of 1647 were visualized paramyxovirus particles pleomorphic, roughly spherical or filamentous, measuring 100 to 500 nm of diameter containing an envelope covered with spikes and characteristic helical herring-bone-like nucleocapsid measuring 15 to 20 nm in diameter. Ultrathin sections of the small intestine fragments revealed the presence of amorphous granular intracytoplasmic inclusions surrounded by membrane and containing viral nucleocapsid measuring 10-14 nm in diameter. Immature particles budding from cell membranes, pleomorphic, spherical and tubular particles containing viral nucleocapsid strands, and the complete particles measured up to 170 nm in diameter were seen in the cytoplasm. Intranuclear inclusions containing viral nucleocapsid were also visualized. Nuclei showed a marginalized chromatin.

Las enfermedades causadas por paramixovirus (APMV) ocurren mundialmente, tanto en aves de corral, en aquellas en vida libre o en cautiverio, lo que demuestra la importancia económica y ecológica de estos virus. El paramixovirus aviario pertenece a la familia paramyxoviridae, subfamilia paramyxovirinae y género avulavirus. Durante el periodo de 2000 a 2011, muestras de heces y fragmentos del intestino delgado de 1647 especies de aves han sido enviados al Laboratorio de Microscopía Electrónica, Instituto Biológico de São Paulo, para el diagnóstico de agentes virales. Las heces y fragmentos del intestino delgado, se procesaron por las técnicas de contraste negativo (preparación rápida) y la inclusión en resina. Al microscopio electrónico de transmisión mediante la técnica de contraste negativo se visualizaron en muestras de 294 aves, partículas de paramixovirus, pleomórficas, más o menos esféricas o filamentosas, de 100 a 500 nm de diámetro que contenían un sobre cubierto por púas que presentaban característica helicoidal, con nucleocapside tipo espiga, midiendo de 15 a 20 nm de diámetro. Secciones ultrafinas de los fragmentos del intestino delgado, revelaron en el citoplasma la presencia de inclusiones granulares amorfas rodeadas por una membrana, contiendo nucleocapside viral midiendo de 10-14 nm de diámetro, partículas inmaduras brotando de las membranas celulares, partículas virales tubulares, esféricas o pleomórficas que contenían filamentos nucleocapside. Estas partículas completas alcanzaban a los 170 nm de diámetro. Fueron observadas también, inclusiones intranucleares contiendo nucleocapside viral. Los núcleos mostraron una cromatina marginal.

Research of Viral Agent in Free-living Pigeon Feces (Columba livia) in the City of São Paulo, SP, Brazil, for Transmission Electron Microscopy / Investigación de Agentes Virales en Heces de Palomas de Vida Libre (Columba livia) en la Ciudad de São Paulo, SP, Brasil, Através de Miscroscopía Electrónica de Transmisión

The pigeon feces are vehicle of diseases both for humans and other animal species. In these birds, the most important viral diseases of the digestive tract are transmitted by the paramyxovirus, adenovirus and coronavirus. Avian paramyxoviruses have been isolated from a variety of species of free living and domestic birds worldwide, with several symptoms and clinical signs and economic losses. Paramyxoviruses belong to the Paramyxoviridae family and Avulovirus genus that includes nine serotypes (APMV 1 to 9). Avian adenoviruses belong to the Adenoviridae family and Aviadenovirus genus. In pigeons, cause classical adenovirosis and necrotizing hepatitis. The respiratory and enteric tracts are common targets of coronavirus. They belong to the Coronaviridae family and to 3a and 3c groups. In this study, we described the presence of viral agents in free-living pigeon feces (Columba livia) from the city of São Paulo, Brazil. The feces were processed by negative staining technique (rapid preparation) for transmission electron microscopy. In this technique paramyxoviruses particles, pleomorphic, roughly spherical or filamentous, measuring 100 to 500 nm of diameter containing an envelope covered by spikes, with characteristic helical herring-bone-like nucleocapsid, measuring 15 to 20 nm in diameter, were visualized in 45 (79 percent) out of 57 feces samples. In 2 (3.5 percent) samples, paramyxovirus and adenovirus particles were simultaneously visualized. Adenovirus particles were isometric, spherical, characterized as "complete "or" empty ", measuring between 70 and 90 nm in diameter. Paramyxovirus and coronavirus particles were detected in 3 (5.2 percent) samples. Coronaviruses were pleomorphic with a diameter of 75-160 nm containing a solar corona-shaped envelope, with projections of approximately 20 nm of diameter. Seven (12.3 percent) samples were negative for viral particles.

Los heces de las palomas constituyen vehículos de enfermedades importantes, tanto para el Hombre como para otras especies animales. En estas aves, las enfermedades virales más importantes del tracto digestivo son transmitidas por los paramixovirus, adenovirus y coronavirus. Paramixovirus aviario, en todo el mundo, ha sido aislado de una variedad de especies de vida libre y de aves domésticas, que causan variados síntomas y señales clínicas con pérdidas económicas. El Paramixovirus pertenece a la familia Paramyxoviridae y al género Avulavirus que incluye nueve serotipos (APMV 1 a 9). Adenovirus aviario pertenece al género de la familia Adenoviridae y género Aviadenovirus. En las palomas, causan la adenovirosis clásica y la hepatitis necrotizante. El tracto respiratorio y entérico son los albos comunes de los coronavirus. Ellos pertenecen a la familia Coronaviridae y a los grupos 3a y 3c. En este trabajo, se describe la presencia de agentes virales en las heces de palomas de vida libre (Columba livia) en la ciudad de São Paulo, Brasil. Las heces se procesaron para la técnica de microscopía electrónica de transmisión, a través de la técnica de contrastación negativa (preparación rápida). A través de esta técnica fueron visualizadas las partículas de paramixovirus, pleomórficas, más o menos esféricas o filamentosas, de 100 a 500 nm de diámetro que contiene un envoltorio cubierto con espículas, con nucleocapside con características helicoidales, midiendo de 15 a 20 nm de diámetro en 45 (79 por ciento) de 57 muestras. En 2 (3,5 por ciento) muestras, fueron observadas simultáneamente partículas de paramixovirus y de adenovirus. Las partículas de adenovirus eran isométricas, esféricas, caracterizadas como “completa " o “vacía ", midiendo entre 70 y 90 nm de diámetro. Fueron analizadas en tres muestras (5,2 por ciento) las partículas de paramixovirus y coronavirus. Los coronavirus son pleomórficos, con un diámetro de 75 a 160 nm, que contiene un capa en forma de corona solar con proyecciones de aproximadamente 20 nm de diámetro. Siete (12,3 por ciento) muestras fueron negativas para las partículas virales.

Viral research in Brazilian owls (Tyto alba and Rhinoptynx clamator) by transmission electron microscopy / Investigación viral en buhos brasileños (Tyto alba y Rhinoptynx clamator) a través de microscopía electrónica de transmisión

The barn-owl (Tyto Alba) and striped-owl (Rhinoptynx clamator) belong respectively to the families Tytonidae and Strigidae. Avian paramyxoviruses have been isolated from a variety of species of wild and domestic birds wordlwide causing diverse clinical symptoms and signs. Paramyxoviruses belong to the family Paramyxoviridae and Avulovirus genus, including nine serotypes (APMV 1 to 9). The lymphoid leukosis is a retrovirus-induced neoplasia. The avian retroviruses belong to the Retroviridae family and to the Alpharetrovirus genus. Coronaviruses can cause respiratory and enteric disease in several species of birds. They belong to the Coronaviridae family and to the groups 3a e 3c. In this study, we describe the presence of viruses in four owls, two barn owls (Tyto alba) and two striped owls (Rhinoptynx clamator), rescued from tree-lined streets of Sao Paulo, Brazil and sent to the Recovery Center of Wild Animals of the Tietê Ecological Park, where the animals died. Fragments of lung, liver and small intestine of these birds were processed for transmission electron microscopy utilizing negative staining (rapid preparation), immunoelectron microscopy and immunocitochemistry techniques. Under the transmission electron microscopy paramyxovirus particles, pleomorphic, roughly spherical or filamentous, measuring 100 to 500 nm of diameter containing an envelope covered by spikes, an herring-bone helical nucleocapsid-like structure, measuring 15 to 20 nm in diameter, were visualized in the samples of lung, liver and small intestine of all owls. In small intestine samples of the two striped-owl (owls 3 and 4) it was detected pleomorphic coronavirus particles with a diameter of 75-160 nm containing a solar corona-shaped envelope, with projections of approximately 20 nm of diameter. In liver fragments of one striped-owl (owl 4) pleomorphic particles of retrovirus with a diameter of 80-145 nm containing an envelope with short projections and diameter of 9 nm were....

La lechuza (Tyto Alba) y el búho de orejas (Rhinoptynx clamator) pertenecen respectivamente a las familias Strigidae y Tytonidae. El paramixovirus aviario se ha aislado de especies de vida silveste como las aves domésticas por todo el mundo, causando diversos síntomas clínicos. El paramixovirus pertenece a la familia Paramyxoviridae y al Avulovirus genus que incluye nueve serotipos (APMV 1 a 9). La leucosis linfoide es una neoplasia inducida por retrovirus. Los retrovirus aviarios pertenecen a la familia Retroviridae y el género Alpharetrovirus. Los coronavirus pueden causar enfermedades respiratorias y entéricas en varias especies de aves. Ellos pertenecen a la familia Coronaviridae y a los grupos 3a y 3c. En este estudio, se describe la presencia del virus en cuatro búhos, dos lechuzas (Tyto alba) y dos búhos de orejas (Rhinoptynx clamator), rescatados de las calles arboladas de São Paulo, Brasil y enviados al Centro de Recuperación de Animales Silvestres del Parque Ecológico de Tietê, donde hubo murieron los animales. Fragmentos de pulmón, delhígado y del intestino delgado de estas aves fueron procesados para microscopía electrónica de transmisión utilizando tinción negativa (preparación rápida), inmunomicroscopía y técnicas de inmunocitoquímica. Bajo microscopía electrónica de transmisión, partículas de paramixovirus, pleomórficas, aproximadamente esféricas o filamentosas, de 100 a 500 nm de diámetro con un sobre cubierto por espigas, y nucleocápside helicoidal con características de espiga, midiendo 15 a 20 nm de diámetro, fueron visualizadas en las muestras de pulmón, hígado e intestino delgado de todos los búhos. En muestras de intestino delgado de dos búho de orejas (búhos 3 y 4) se detectaron partículas pleomórficas con coronavirus de un diámetro de 75-160 nm con un sobre con forma de corona solar, con proyecciones de aproximadamente 20 nm de diámetro. En el hígado de un búho de orejas (búho 4) se observaron partículas pleomórficas de retrovirus con ...

Ultrastructural study of poxvirus causing myxomatosis in rabbits, in São Paulo and Santa Catarina, Brazil / Estudio ultraestructural del poxvirus causal de mixomatosis en conejos, en São Paulo y Santa Catarina, Brasil

The myxomatosis is a contagious worldwide disease caused by poxvirus which infects domestic and wild rabbits. In the present study we present two distinct outbreaks of myxomatosis when raising rabbits, one for commercial purpose of production of meat and skins and, another one for the commercialization of ornamental rabbits. The observed signs were ocular, auricular, nasal, testis lesions and many times scattered throughout the body of the animals. The lesions were characterized by formation of nodules that by palpation disclosed gummy or gelatinous aspect. At the transmission electron microscopy, all the skin and crust samples were analyzed by negative staining technique. A great number of particles with morphology similar to the poxvirus, some enveloped in a brick-shaped and irregular disposition of tubules on the external membrane, measuring 300x240 nm on the average were visualized. Ultra thin sections revealed the presence of intracytoplasmic inclusion bodies surrounded by membrane containing oval particles, measuring 270 x 130 nm, containing nucleus or an internal biconcave (dumbbell-shaped) core. Immature particles (empty), surrounded by membrane were also observed. In addition, intracytoplasmic electron dense inclusion bodies containing viral particles budding of dense amorphous material and intranuclear fibrillar or "digital" inclusions showing a regular striation and arranged in groups were found in the middle of granular material. The nuclei were deformed with densely condensed chromatin forming amorphous and electron dense inclusion bodies. In the immunocytochemistry technique, the antigen-antibody reaction was strongly marked by the particles of colloidal gold, emphasizing the viral particles. The techniques used in this study were important in the diagnosis of the affected animals.

La mixomatosis es una enfermedad contagiosa de distribución mundial, causada por poxvirus que infecta conejos domésticos y salvajes. En este estudio presentamos dos distintos surtos por mixomatosis que ocurrieron en producciones de conejos, una para fines comerciales de producción de carne y pieles y otra para el comercio de conejos domésticos. Las señales observadas fueron afecciones oculares, nasales, testiculares y, a veces, también distribuida por todo el cuerpo de los animales. Estas se caracterizaban por formación de nódulos que a la palpación tenían un aspecto gelatinoso o gomoso. En la microscopía electrónica de transmisión, por la técnica de contrastación negativa, se pudo observar en todas las muestras examinadas de piel y de costras, un gran número de partículas típicas de poxvirus, con envoltura y forma de ladrillo, mostrando disposición irregular de los túbulos sobre la membrana externa, midiendo 300 x 240 nm en el promedio. Cortes ultrafinos de fragmentos de piel y de costras revelaron la presencia de cuerpos de inclusión intracitoplasmáticas, envueltos por membrana y conteniendo partículas ovales, midiendo 270 x 130 nm, conteniendo núcleo o centro interno bicóncavo (forma de mancuernas). Partículas inmaduras (vacías) envueltas por membrana fueron observadas. También fueron analizados cuerpos de inclusión intracitoplasmáticos, electrodensos, conteniendo partículas virales brotando del material denso y amorfo. Fueron observadas inclusiones intranucleares fibrilares o "digitales" mostrando una estriación periódica y disposición en grupos en medio del material granular. Los núcleos estaban deformados con cromatina densamente condensada formando cuerpos de inclusiones electrodensas y amorfas. En la técnica de imunocitoquímica la reacción antígeno-anticuerpo fue intensamente marcada por las partículas de oro coloidal realzando fuertemente las partículas virales.

Morfología y citoquímica de cultivos celulares de Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) y susceptibilidad a Leishmania panamensis (Kinetoplastida: Trypanosomatidae)

Morphology and cytochemistry of Aedes aegypti’s cell cultures (Diptera: Culicidae) and susceptibility to Leishmania panamensis (Kinetoplastida: Trypanosomatidae). The first cellular line of Aedes aegypti was developed by Grace in 1966; afterwards, other cellular lines of this species have been generated. These have been used for the study of pathogenic organisms like viruses, bacteria and parasites, which demonstrates their importance in biomedical applications. This research describes, for the first time, some cytochemical characteristics of A. aegypti cell cultures, that were infected with (MHOM/CO/87CL412) strain of Leishmania panamensis. A morphological study of the cell culture was also carried out. Maintenance of the cell culture, parasites and infection in vitro were carried out in the Laboratory of Entomology, Cell Biology and Genetics of the Universidad de La Salle. The cell cultures infected with the parasite were maintained in a mixture of mediums Grace/L15, supplemented with 10 % fetal bovine serum (FBS) at pH 6.8 and a temperature of 26 ºC, during 3, 6 and 9 post-infection days. After this, these cell cultures were processed through High Resolution Light Microscopy (HRLM) and Transmission Electron Microscopy (TEM) based on standard protocols defined by the Group of Microscopy and Image Analyses of the Instituto Nacional de Salud. Semi-fine slices of 1 µm colored with toluidine blue were used for the morphological analysis of the culture, and ultra fine cuts of 60 to 90 nm stained with uranyl acetate and lead citrate where used for the ultrastructural study. In addition, PAS and peroxidase staining was carried out in cells fixed with methanol. The morphometric study was analyzed with software ImageJ (NIH). In the semi-fine slices, small cells were observed showing fibroblastic appearance 10.84±2.54 µm in length and 5.31±1.26 µm wide; other cells had epithelial appearance with a great peripheral nucleus, voluminous and vacuolated cytoplasm, 23.04±4,00 µm in length and 13.96±3.70 µm wide. These last ones predominated over the ones with fibroblastic appearance. Regarding the PAS coloration, 7.08 % of the cells presented abundant PAS positive cytoplasmatic granules which indicated polysaccharides presence. The peroxidase test gave a negative result. The greatest percentage of infection (18.90 %) of one total of 101 cells, turned up by day 6. Some cells analyzed by TEM presented a vacuolated aspect cytoplasm; some contained parasites, other fibrillar material and others were empty. The results indicate that A. aegypti cell culture can support the internalization and transformation of the parasite, which demonstrates the capacity that these cell cultures have to be infected with L. panamensis and to maintain the infection for approximately one week. Rev. Biol. Trop. 56 (2): 447-458. Epub 2008 June 30.

La primera línea celular de Aedes aegypti fue establecida por Grace en 1966 y desde entonces se han utilizado para el estudio de virus, bacterias y parásitos. En el presente trabajo se describen, por primera vez, algunas características citoquímicas de los cultivos celulares de A. aegypti, infectados con la cepa (MHOM/CO/87CL412) de Leishmania panamensis. También se realizó un estudio morfológico de las células del cultivo. Se observaron 30 células pequeñas con apariencia fibrolastoide de 10.84±2.54 µm de largo y 5.31±1.26 µm de ancho; otras 30 presentaron apariencia epitelioide con 23.04±4.00 µm de largo y 13.96±3.70 µm de ancho; éstas últimas predominaron sobre las de apariencia fibroblastoide. De 113 células, un 7.08%, presentaron abundantes gránulos citoplasmáticos positivos con la coloración de PAS, indicando presencia de polisacáridos. La prueba de peroxidasa dio un resultado negativo. El mayor porcentaje de infección (18.90%), de un total de 101 células, se presentó el día 6. Ultraestructuralmente, las células presentaron un citoplasma con aspecto vacuolado; algunas contenían parásitos, otras material fibrilar y otras estaban vacías. Los resultados indican que los cultivos celulares de A. aegypti pueden ser infectados por L. panamensis y mantener dicho proceso por aproximadamente una semana.

Ultraestructura de la microvasculatura en lesiones premalignas y malignas de la mucosa bucal / Microvasculature ultrastructure in premalignant and malignant lesions of oral mucosa

El proceso de angiogénesis y remodelado vascular es esencial para el crecimiento, la invasión y la metástasis tumoral. Los vasos sanguíneos tumorales presentan anormalidades estructurales y funcionales. El objetivo de este trabajo fue caracterizar las alteraciones ultraestructurales de la microvasculatura de displasias y carcinomas espinocelulares de la mucosa bucal como un modelo de progresión tumoral, mediante microscopía electrónica de transmisión convencional. Las alteraciones encontradas en los casos de displasia leve y moderada incluyeron la distribución y el número variable de las vesículas pinocíticas y cavéolas, así como la proliferación de algunos organelos. Asimismo, en ambos tipos de displasia se apreció la membrana basal reduplicada y el pericito en algunos casos se observó alterado. En los carcinomas espinocelulares bucales también se encontró el engrosamiento y reduplicación de la membrana basal. La hipertrofia del endotelio fue frecuente, con el edema del mismo y del pericito. Las prolongaciones del endotelio hacia la luz fueron observadas en las displasias leve y moderada y en los carcinomas bucales. Tales resultados podrían sugerir anormalidades en el funcionamiento de los capilares, en relación a cambios en la actividad metabólica y la permeabilidad de las células endoteliales y los pericitos.

O processo do angiogénesis e o remodelado vascular é essencial para o crescimento, a invasão e o metástasis do tumor. A embarcação de sangue presente do tumor estruturais e funcionais anomalias. O objetivo deste trabalho era caracterizar o ultrastructural alterações do microvasculatura dos displasias e dos carcinomas os espinocelulares da mucosa oral gostam de um modelo do tumor progressão, por meio do microscopio eletrônico da transmissão convencional. As alterações encontradas nos exemplos do displasia pesam e moderam incluíram a distribuição e o número variável do spinocíticase vesicles dos cavéolas, o proliferacion de alguns organelos. Também, em ambos os tipos de displasia a membrana basal do reduplicada estava engrossada e o pericito em alguns casos foi observado alterou-se. Em carcinomas orais os espinocelulares eram também engrossamento e reduplicación da membrana basal. Hipertrofia do endotelio era freqüente, com o edema do mesmo e o pericito. Os prolongations do endotelio para a luz foram observados dentro displasias ligeiros e moderados e os carcinomas orais. Tais resultados podiam sugerir anomalias na operação do capilar, com relação às mudanças na atividade metabolica e na permeabilidade das pilhas dos endoteliales e dos pericitos.

The process of angiogenesis and vascular remodelling is essential for tumor growth, invasion and metastasis. Tumor blood vessels show structural and functional abnormalities. The aim this work was characterize the ultrastructural alterations of microvasculature in dysplasias and squamous carcinomas of oral mucosa as a model of tumor progression by conventional transmission electron microscopy. Alterations included a variable distribution and number of pinocytotic vesicles and caveolae, as well as proliferation of some organelles in slight and moderate dysplasias. Likewise, the basement membrane looked reduplicated in both cases and pericytes in some cases was alterations. In oral squamous carcinomas capillary basement membrane was thickened and reduplicated. Endothelial hypertrophy was frequent with edema and also in the pericytes. Endothelial cell cytoplasm infoldings into the lumen were observed in slight and moderate dysplasias and oral squamous carcinoma. The results could suggest an abnormal capillary funtion in relation to metabolic activity and permeability of endothelial cells and pericytes.

Morphometric and High Resolution Scanning Electron Microscopy Study of Calomys callosus Major Palatine Nerve / Estudio Morfométrico y Electrónico de Barrido de Alta Resolución del Nervio Palatino Mayor del Calomys callosus

The characteristics of Calomys callosus major palatine nerve were studied employing light, transmission and high resolution scanning electron microscopy methods. For light microscopy, the specimens were fixed in Bouin's fixative solution, processed routinely and the sections were stained with hematoxylin­eosin and Azo-Carmin to identify nerve fibers. For high resolution scanning electron microscopy the O-D-O method reported by Tanaka (1989) was used to examine nerve fiber components and to measure the myelin sheath. Thin sections were examined by transmission electron microscopy to show axoplasmic elements and adjacent structures. The results revealed nerve fiber bundles in the lamina propria of Calomys callosus palatine mucosa. Nerve fibers were enveloped by cytoplasmic lamellae of perineural cells and adjacent collagen bundles, their diameter ranged from 1 to 6 µm, and the myelin sheath ranged from 0.2 to 0.9 µm. In the nerve fibers axoplasm were seen neurofilaments, mitochondria, neurotubules and few unmyelinated fibers.

Se estudiaron las características del nervio palatino mayor del Calomys callosus, utilizando métodos de microscopía luz y electrónica de transmisión y de barrido de alta resolución. En el caso de microscopía de luz las muestras se fijaron con solución fijadora de Bouin, se trabajaron de la forma habitual y las secciones se tiñeron con hematoxilina-eosina y con azo-carmín para identificar las fibras nerviosas. En el caso de microscopía electrónica de alta resolución se utilizó el método O-D-O indicado por Tanaka (1989) para examinar los componentes de la fibra nerviosa y medir la vaina de mielina. Se examinaron secciones finas usando microscopio electrónico de transmisión para poner en evidencia los elementos axoplásmicos y las estructuras adyacentes. Los resultados demuestran la presencia de uniones de la fibra nerviosa en la lámina palatina de la mucosa de Calomys callosus. Las fibras nerviosas están envueltas en lamelas citoplasmáticas de células perineurales y uniones de colágeno adyacente y su diámetro varía de 1 a 6µm; la vaina de mielina varía de 0.2 a 0.9 µm. En el axoplasma de las fibras nerviosas se observaron neurofilamentos, mitocondrias y neurotúbulos y se encontraron unas pocas fibras sin mielina.

Infección cervical por virus del papiloma humano: genotipificación por hibridación in situ y análisis ultraestructural por microscopia electrónica de transmisión

INTRODUCCIÓN: El virus del papiloma humano (VPH) es el virus que más frecuentemente se transmite por contacto sexual y está fuertemente asociado con el cáncer cérvicouterino. Los tipos virales que se documentan con mayor frecuencia en el epitelio cervical son 6, 11, 16, 18, 31 y 33, los cuales difieren en su capacidad oncogénica; los dos primeros presentan bajo potencial y los últimos alto potencial oncogénico. Objetivo: Identificar los tipos de VPH presentes en biopsias de cervix con evidencia citológica, colposcópica e histopatológica de infección viral, y realizar un análisis ultraestructural de los cambios celulares asociados. Material y métodos: Usamos la hibridación in situ (HIS) con sondas biotiniladas para identificar los tipos virales, y las biopsias positivas se procesaron para análisis ultraestructural por microscopia electrónica. Resultados: Se analizaron por HIS 63 biopsias cervicales, 24 (38%) resultaron positivas para alguno de los tipos virales probados, los más frecuentes fueron los tipos 6/11 (24%), los cuales en el análisis ultraestructural se asociaron a la presencia de varios nucléolos en núcleos con bordes crenados, en tanto que los tipos oncogénicos se asociaron con la presencia de partículas virales en núcleos, que frecuentemente se presentan multilobulados y con inclusiones citoplasmáticas. En ambos casos es evidente la desorganización de los desmosomas. Conclusiones: La prevalencia de VPH encontrada en este estudio concuerda con lo reportado para esta infección viral en otros estudios donde se usa la misma técnica, los tipos virales concuerdan con el diagnóstico inicial, y el estudio ultraestructural arroja evidencias sobre las principales alteraciones celulares asociadas a la infección viral.

Introduction: Human papillomavirus (HPV) is the most common sexually transmitted virus, is strongly associated with cervical cancer. HPV genital types differs in oncogenic potential, types 6/11 are low-risk and, types 16/18, 31/33 are high-risk. In situ Hybridization (ISH) analysis has advantage of being able to detect both, the specific cellular types infected with viral DNA and the HPV types in cervical biopsies and therefore, cervical cancer patient's risk. Objective: This work was performed in order to typing HPV in cervical biopsies with cytological, colposcopical and histopathological evidence of HPV infection, and to search ultrastructural changes associates with viral infection. Results: We analyzed, by ISH, 63 cervical biopsies, 24 (38%) positives to some viral type, HPV types 6/11 were more common types (24%) consistent with the more frequent, both colposcopical and histopathological diagnostic; Low-grade intraepithelial lesion. Ultraestructural analysis showed cellular alteration in association with low-risk types, principally irregular nucleus and several nucleolus for nucleus, as long as cells infected with oncogenic types DNA showed multilobulated nucleus, cytoplasmic inclusions and viral particles in nucleus. In both cases is clear an disorganization of cellular junctions desmosomes. Conclusions: The HPV prevalence in this study was consistent with other reported, using ISH analysis, the more common types were low-risk types in agreement with previous diagnostic, and electron microscopy analysis provide evidence on the main cell alterations associated with viral infection.

Un método rápido de reprocesamiento para microscopia electrónica de cortes histológicos en parafina / A fast method of re-processing for electron microscopy of histologic cuts in parafine

Se describe un método simple rápido para el re-procesamiento de tejidos incluidos en parafina usados en microscopia electrónica de transmisión (MET) y de rastreo (MER). Los tejidos incluidos en parafina se seccionaron, desparafinaron en tolueno y se expusieron a vapores de osmio mediante irradiación con microorndas en horno de microondas doméstico. Los tejidos fueron embebidos en resina epóxica, polimerizados y seccionados. El método de procesamiento requirió un tiempo relativamente corto (aproximadamente 30 minutos para MET y 15 para MER) y rinde una calidad razonable de la ultraestructura para propósitos diagnósticos.

A simple and rapid method is described for re-processing of light microscopy paraffin sections to observe they under transmission electron microscopy (TEM) and scanning electron microscopy (SEM). The paraffin-embedded tissue is sectioned and deparaffinized in toluene; then exposed to osmium vapor under microwave irradiation using a domestic microwave oven. The tissues were embedded in epoxy resin, polymerized and ultrathin sectioned. The method requires a relatively short time (about 30 minutes for TEM and 15 for SEM), and produces a reasonable quality of the ultrastructure for diagnostic purposes.